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尼氏染色的具體操作步驟及注意事項

更新時間:2022-09-08 00:00:00       點擊次數:13049

  關于尼氏染色,你的了解有多少呢?來跟小編一起看看吧!
  尼氏體(Nisslbody)或稱尼氏小體,分布于神經細胞胞質內的三角形或橢圓形小塊狀物質。尼氏染色(FrannaNissl(1860-1919))1892年創立了Nissl染色法,以發現Nissl小體和Nissl變性而聞名。常用的堿性染料有Cresylviolet(焦油紫,甲酚紫,克紫);thionine(硫荲);tolridineblue(甲苯胺藍)等。
  尼氏染色原理
  神經元細胞體包括一個具有皺褶核膜的大細胞核、稀疏的染色質和一個明顯的核仁。在細胞體中細胞質是尼氏顆粒,即能夠代表粗面內質網并在很多神經元中產生特異的斑點狀嗜堿性表現的嗜堿性顆粒。尼氏顆粒可以用很多染色來顯示如中性紅、亞甲基藍、甲苯胺藍和甲基紫等。染色的變異、pH和分化的時間使一些染色既可以僅突出尼氏物質,也可以顯示神經元的細胞核和神經膠質。各種神經細胞內都含有尼氏體,但其形狀、數量、分布位置常常不同。尼氏體也存在于樹突中,但不在于軸突和包體的軸丘。尼氏體會因為生理狀態的變化而變化,尼氏體是神經元內合成蛋白質合成的重要部位,當神經元受到刺激后,包體內的尼氏體會明顯減少。通常尼氏能被堿性染料如硫堇、亞甲藍、甲苯胺藍和焦油紫等染料染成紫藍色。
  尼氏染色操作步驟(僅供參考):
  1.固定:可采用乙醇、Carnoy固定液或中性福爾馬林溶液。
  2.組織切片
  3.切片脫蠟入水。
  4.用甲基紫染色液涂片,染色10~20min。
  5.蒸餾水沖洗。
  6.用NisslDifferentiation分化4~8s,直到大部分染色被消除。
  7.直接經無水乙醇至二甲苯,顯微鏡下觀察。
  8.如果有必要,重復步驟6和7。重復時,給予少量NissolDifferentiation分化。
  9.在二甲苯中充分沖洗。加拿大香脂或DPX封片。
  尼氏染色結果:
  尼氏物質或尼氏小體紫黑藍色;
  神經元;淡紫藍色;
  細胞核紫藍色;
  尼氏染色注意事項:
  1.尼氏體離體后容易溶解,所以組織取出后應立即固定,否則難以著色。
  2.組織固定起著非常重要的作用,固定可采用乙醇、Carnoy固定液或中性福爾馬林溶液。
  3.本染色液對石蠟組織切片的尼氏染色效果較好。
  4.如果要證實尼氏物質的存在,那么染色后必須要用NissolDifferentiation分化。
  5.石蠟切片厚度7~10μm或25μm(皮質神經元密度的評估要用25μm厚的切片)。
  6.染色后的標本務必避光保存,否則容易褪色。
  7.主要由甲基紫染色液、分化液等組成。尼氏物質呈紫黑藍色,神經元呈淡紫藍色,細胞核呈紫藍色。
  以上就是尼氏染色的相關介紹,你了解了嗎?

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