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泌尿感染模型構建

簡要描述:構建泌尿系統感染(UTI)動物模型是研究尿路致病菌的致病機制、宿主免疫應答及抗菌藥物評價的重要手段。以下是基于小鼠的標準化泌尿感染模型構建方案,涵蓋急性膀胱炎、腎盂腎炎及導管相關感染模型。

  • 更新時間:2025-06-26 17:10:22
  • 訪  問  量:530

詳細介紹

一、泌尿感染模型構建選擇依據

模型類型適用研究常用病原體
急性膀胱炎宿主-病原體互作機制大腸桿菌UPEC(如UTI89)
腎盂腎炎上尿路感染病理生理學肺炎克雷伯菌、變形桿菌
導管相關UTI生物膜形成與器械相關感染銅綠假單胞菌、表皮葡萄球菌
慢性/復發性UTI免疫逃逸與持久性感染大腸桿菌(形成細胞內菌落)

二、泌尿感染模型構建標準化操作流程(以UPEC膀胱感染為例)

1. 材料準備

  • 動物:8-10周齡雌性C57BL/6小鼠(雌性尿道短更易感染)

  • 菌株:熒光標記的UPEC(如UTI89-GFP,便于顯微觀察)

  • 試劑

    • PBS(pH 7.4)、0.1%明膠(增強細菌粘附)

    • 麻醉劑(異fu烷)、導尿管(24G靜脈套管針)

2. 感染步驟

  1. 術前準備

    • 禁水4小時(提高膀胱內細菌定植率)。

    • 麻醉小鼠,仰臥位固定,消毒尿道口。

  2. 膀胱導尿與接種

    • 將24G套管針插入尿道(深度約1cm,至膀胱)。

    • 注入50μL菌液(1×10^7-10^8 CFU,含0.1%明膠)。

    • 夾閉尿道口1分鐘防止反流。

  3. 術后管理

    • 恢復自由飲水,單籠飼養觀察。

3. 關鍵參數

  • 細菌劑量:1×10^7 CFU(急性模型)、1×10^5 CFU(慢性模型)

  • 感染周期

    • 急性:24-48小時(炎癥峰值)

    • 慢性:≥7天(研究持久性感染)


三、其他泌尿感染模型

1. 腎盂腎炎模型

  • 操作改進

    1. 尾靜脈注射1×10^6 CFU UPEC(通過血行感染腎臟)。

    2. 或直接經輸尿管插管接種(需顯微手術技術)。

  • 檢測重點

    • 腎臟細菌載量(CFU/g)、組織病理(腎膿腫評分)。

2. 導管相關UTI模型

  • 操作

    1. 膀胱植入硅膠導管(長度2mm)。

    2. 接種5μL菌液(1×10^5 CFU銅綠假單胞菌)。

    3. 7天后取出導管,超聲震蕩后CFU計數。

  • 檢測:掃描電鏡觀察導管表面生物膜。

3. 復發性UTI模型

  • 策略

    1. 先建立急性感染(1×10^7 CFU UPEC)。

    2. 抗生素治療后(如環bing沙星3天)誘導再感染。


四、感染評估方法

檢測目標方法判定標準
細菌載量膀胱/腎臟勻漿CFU計數>1×10^4 CFU/器官提示感染成功
炎癥指標尿液中白細胞酯酶試紙檢測≥++為陽性
組織病理HE染色(膀胱/腎臟)膀胱黏膜水腫、中性粒細胞浸潤
生物膜共聚焦顯微鏡(SYTO9/PI染色)膀胱上皮表面細菌聚集體
免疫應答qPCR檢測IL-6、IL-8 mRNA表達量上調≥3倍

五、注意事項與優化

  1. 性別選擇

    • 雌鼠尿道短(3-5mm),更易操作且感染率高。

  2. 接種技巧

    • 導尿時避免損傷膀胱(進針阻力突然消失提示進入膀胱)。

  3. 減少污染

    • 接種前擠壓小鼠腹部排空殘余尿。

  4. 模擬臨床

    • 使用臨床分離的ESBL大腸桿菌增強轉化價值。


六、常見問題解決

  • 低感染率

    • 增加禁水時間至6小時,或使用D-甘露糖預處理(抑制細菌清除)。

  • 膀胱穿孔

    • 改用更細導管(26G),限制插入深度。

  • 全身感染

    • 降低接種劑量至1×10^6 CFU以下。

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