一、HBV動物模型分類及構(gòu)建方法

1. 黑猩猩模型（Chimpanzee）

• 特點：w一能w全模擬人類HBV自然感染的模型，支持病毒完整生命周期（感染、復制、免疫應(yīng)答）。

• 局限性：倫理限制、成本高昂，目前已極少使用。

2. 樹鼩模型（Tree Shrew, Tupaia belangeri）

• 特點：

• 小型靈長類動物，對HBV部分易感，可發(fā)生急性感染（病毒血癥、肝損傷）。

• 適合研究早期感染和免疫應(yīng)答。

• 構(gòu)建方法：

• 通過尾靜脈或肝內(nèi)注射臨床HBV毒株（如基因型B或C）。

• 檢測指標：血清HBsAg/HBeAg（ELISA）、HBV DNA（qPCR）、肝組織HBcAg（免疫組化）。

• 缺點：感染率不穩(wěn)定，難以形成慢性感染。

3. 乙肝動物模型構(gòu)建：人源化肝臟小鼠模型（Humanized Liver Mice）

通過移植人肝細胞或造血干細胞，使小鼠具備HBV易感性：

• 常用模型：

• uPA/SCID小鼠：表達尿j酶纖溶酶原激活劑（uPA），小鼠肝細胞凋亡后移植人肝細胞（如FRG小鼠）。

• FRG小鼠（Fah?/? Rag2?/? IL2Rγ?/?）：通過人肝細胞重建人肝組織。

• 構(gòu)建步驟：

1. 移植人原代肝細胞（或HepaRG細胞系）。

2. 通過尾靜脈注射HBV病毒顆粒（≥1×10? IU/mouse）。

3. 監(jiān)測血清HBsAg、HBV DNA及肝內(nèi)cccDNA（持續(xù)感染標志）。

• 優(yōu)勢：支持HBV慢性感染和藥物評價（如核苷類似物）。

• 缺點：成本高，需專業(yè)操作（如肝細胞移植）。

4. HBV轉(zhuǎn)基因小鼠（HBV-Tg Mice）（乙肝動物模型構(gòu)建）

• 原理：通過基因編輯在小鼠基因組中整合HBV全基因組或部分片段（如1.3倍HBV基因組）。

• 常用品系：如C57BL/6J背景的HBV1.3 Tg小鼠。

• 特點：

• 持續(xù)表達HBsAg/HBeAg，但缺乏免疫介導的肝損傷（免疫耐受）。

• 適用于疫苗免疫機制研究或免疫激活模型（如通過腺病毒表達HBV抗原打破耐受）。

• 局限性：非自然感染，病毒復制水平低。

5. 水動力注射模型（Hydrodynamic Injection, HDI）

• 原理：通過尾靜脈快速注射HBV質(zhì)粒DNA（如pAAV-HBV1.3），利用流體壓力使DNA進入肝細胞。

• 步驟：

• 注射體積：8–10%小鼠體重的生理鹽水（如2.5 mL/25g小鼠），5–8秒內(nèi)完成。

• 質(zhì)粒劑量：10–50 μg HBV重組質(zhì)粒。

• 特點：

• 快速誘導HBV抗原表達（1周內(nèi)出現(xiàn)HBsAg），適合急性感染研究。

• 無cccDNA形成，感染持續(xù)時間短（2–4周）。

6. 替代病毒模型（如鴨乙肝病毒/土撥鼠肝炎病毒）

• 鴨乙肝病毒（DHBV）模型：

• 使用雛鴨（1–3日齡）通過靜脈接種DHBV。

• 適用于抗病d藥物初步篩選（如恩替k韋的早期研究）。

• 土撥鼠肝炎病毒（WHV）模型：

• 土撥鼠（Marmota monax）感染W(wǎng)HV后可發(fā)展為慢性肝炎和肝癌，適合致癌機制研究。

二、模型選擇依據(jù)

三、注意事項

1. 實驗設(shè)計：

• 設(shè)立空白對照、病毒對照（如注射HBV陰性血清）及治療組。

• 監(jiān)測動物福利（如人源化小鼠易發(fā)生肝損傷）。

2. 檢測技術(shù)：

• cccDNA檢測：需用特異性PCR或Southern blot。

• 肝組織分析：H&E染色、HBcAg免疫組化、纖維化評分（Ishak評分）。

3. 生物安全：HBV操作需在BSL-2實驗室進行。