一、帶狀皰疹動(dòng)物模型構(gòu)建實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇

1. 常用動(dòng)物及特點(diǎn)

2. 選擇依據(jù)

• 研究潛伏感染 → 豚鼠 或 恒河猴
• 研究神經(jīng)痛 → 大鼠（非感染模型）
• 研究免疫逃逸 → 人源化小鼠

二、帶狀皰疹動(dòng)物模型構(gòu)建病毒株準(zhǔn)備

1. 常用VZV毒株

• 臨床分離株（如Oka株、Ellen株）
• 實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)株（如VZV-32、pOka）
• 重組熒光報(bào)告病毒（如VZV-ORF66-GFP）

2. 病毒擴(kuò)增與滴定

• 細(xì)胞培養(yǎng)：
• 使用 人胚胎成纖維細(xì)胞（HEF） 或 MeWo細(xì)胞 擴(kuò)增VZV。
• 37℃培養(yǎng)，觀察CPE（合胞體形成）。
• 病毒純化：超聲破碎感染細(xì)胞釋放病毒。
• 病毒滴度測(cè)定：
• 噬斑試驗(yàn)（PFU/mL）
• qPCR檢測(cè)病毒DNA拷貝數(shù)

三、感染途徑與劑量

1. 感染方式

2. 感染劑量

• 豚鼠：10?–10? PFU（皮下）
• 恒河猴：10? PFU（靜脈/氣管）
• 人源化小鼠：103–10? PFU（鼻腔）

四、模型評(píng)估指標(biāo)

1. 病毒感染與復(fù)制

• 病毒載量檢測(cè)（qPCR檢測(cè)VZV DNA）
• 背根神經(jīng)節(jié)（DRG）、肺、脾組織
• 病毒抗原檢測(cè)（免疫組化/免疫熒光）

2. 潛伏感染與再激活

• 潛伏期檢測(cè)：
• 原位雜交檢測(cè)VZV潛伏相關(guān)轉(zhuǎn)錄本（如ORF63）
• 再激活誘導(dǎo)：
• 免疫抑制（如環(huán)lin酰胺）
• 紫外線照射（模擬應(yīng)激）

3. 神jing病理學(xué)與疼痛行為

• 組織病理：
• DRG炎癥、神經(jīng)元損傷（HE染色）
• 疼痛評(píng)估（大鼠PHN模型）：
• 機(jī)械痛覺(jué)過(guò)敏（Von Frey纖維）
• 熱痛覺(jué)過(guò)敏（Hargreaves試驗(yàn)）

4. 免疫應(yīng)答

• 體液免疫：ELISA檢測(cè)VZV IgG
• 細(xì)胞免疫：
• IFN-γ ELISPOT（VZV特異性T細(xì)胞）
• 流式檢測(cè)CD4?/CD8? T細(xì)胞

五、注意事項(xiàng)

1. 生物安全

• VZV需在 BSL-2 實(shí)驗(yàn)室操作，恒河猴實(shí)驗(yàn)需 BSL-3（若用高劑量）。

2. 動(dòng)物福利

• 設(shè)置 人道終點(diǎn)（如體重下降>20%、嚴(yán)重神經(jīng)癥狀）。
• 疼痛模型需倫理審批（如大鼠PHN實(shí)驗(yàn)）。

3. 對(duì)照設(shè)置

• 陰性對(duì)照：未感染/PBS組
• 陽(yáng)性對(duì)照：已知致病株（如Oka株）

六、常見(jiàn)問(wèn)題與優(yōu)化

1. 豚鼠模型潛伏但不自發(fā)再激活

• 解決方案：
• 免疫抑制（如潑ni松龍）
• 神經(jīng)損傷（坐骨神經(jīng)結(jié)扎）

2. 人源化小鼠感染效率低

• 優(yōu)化方案：
• 提高感染劑量（10? PFU）
• 使用 人CD34+造血干細(xì)胞重建小鼠

3. 大鼠PHN模型不涉及VZV

• 替代方案：
• HSV-1感染模型（部分模擬VZV神經(jīng)痛）
• 脊神經(jīng)結(jié)扎（SNL）（純機(jī)械痛模型）