一、乙肝動物模型構(gòu)建實驗動物選擇

1. 常用動物模型及特點

2. 選擇依據(jù)

• 研究病毒復(fù)制 → 人源化小鼠 或 AAV-HBV轉(zhuǎn)導(dǎo)模型

• 研究免疫應(yīng)答 → HBV-Tg小鼠 或 AAV-HBV模型

• 藥物開發(fā) → 鴨/土撥鼠模型（初篩）→ 人源化小鼠（驗證）

二、乙肝動物模型構(gòu)建模型構(gòu)建方法

1. 人源化肝臟小鼠模型（接jin人類HBV感染）

步驟：

1. 選擇免疫缺陷小鼠（如FRG小鼠：Fah?/? Rag2?/? Il2rg?/?）。

2. 移植人肝細(xì)胞（原代人肝細(xì)胞或HepaRG細(xì)胞系）。

3. HBV感染（靜脈注射臨床HBV分離株，如基因型A-D）。

4. 監(jiān)測指標(biāo)：

• 血清HBsAg、HBeAg（ELISA）

• HBV DNA載量（qPCR）

• 人肝細(xì)胞嵌合率（人Albumin檢測）

優(yōu)缺點：

• 優(yōu)點：支持完整HBV生命周期（cccDNA形成、病毒分泌）。

• 缺點：成本高、需專業(yè)移植技術(shù)。

2. AAV-HBV轉(zhuǎn)導(dǎo)模型（快速建立持續(xù)感染）

步驟：

1. 選擇AAV血清型（如AAV8，靶向肝臟）。

2. 構(gòu)建AAV-HBV載體（含1.3倍HBV基因組，如pAAV-HBV1.3）。

3. 尾靜脈注射（劑量：1011–1012 vg/只）。

4. 監(jiān)測指標(biāo)：

• 血清HBsAg（持續(xù)6個月以上）

• 肝內(nèi)HBV DNA/RNA（qPCR）

優(yōu)缺點：

• 優(yōu)點：操作簡單、成本低。

• 缺點：非自然感染，無cccDNA形成。

3. HBV轉(zhuǎn)基因小鼠（研究免疫耐受）

常用品系：

• 1.3HBV-Tg：完整HBV基因組，高表達(dá)HBsAg。

• HBV-S-Tg：僅表達(dá)HBsAg（模擬慢性攜帶狀態(tài)）。

應(yīng)用：

• 研究HBV免疫逃逸機制。

• 評估治療性疫苗（如打破免疫耐受）。

4. 鴨/土撥鼠HBV模型（替代模型）

鴨乙肝模型（DHBV）：

• 感染方式：靜脈注射DHBV（10?–10?病毒顆粒）。

• 監(jiān)測指標(biāo)：血清DHBsAg、肝內(nèi)DHBV DNA。

土撥鼠肝炎模型（WHV）：

• 應(yīng)用：評估抗病du藥物（如恩替ka韋）。

三、關(guān)鍵檢測指標(biāo)

1. 病毒學(xué)指標(biāo)

• 血清標(biāo)志物：

• HBsAg、HBeAg（ELISA）

• HBV DNA（qPCR，檢測下限<10 IU/mL）

• 肝內(nèi)HBV標(biāo)志物：

• cccDNA（Southern blot或特異性qPCR）

• HBcAg（免疫組化）

2. 免疫學(xué)指標(biāo)

• T細(xì)胞應(yīng)答：

• HBV特異性CD8? T細(xì)胞（流式檢測MHC多聚體）

• IFN-γ ELISPOT（肽段刺激）

• 體液免疫：

• 抗-HBs抗體（評價疫苗效果）

3. 病理學(xué)分析

• 肝組織HE染色：炎癥、纖維化。

• 天狼星紅染色：肝纖維化程度。

四、注意事項

1. 生物安全

• HBV操作需在 BSL-2 實驗室進(jìn)行。

• 人源化小鼠排泄物可能含HBV，需嚴(yán)格管理。

2. 模型局限性

• 人源化小鼠：缺乏完整免疫系統(tǒng)，難模擬免疫清除期。

• AAV-HBV模型：無cccDNA，不能評估靶向cccDNA的藥物。

3. 對照設(shè)置

• 陰性對照：空載體注射或野生型小鼠。

• 陽性對照：已知抗病du藥物（如替nuo福韋）。

五、應(yīng)用示例

• 藥物評價：人源化小鼠中測試 GS-9620（TLR7激動劑） 對HBV的抑制作用。

• 免疫機制：AAV-HBV模型研究 PD-1抗體 對T細(xì)胞功能的恢復(fù)作用。

• 疫苗開發(fā)：HBV-Tg小鼠評估 治療性疫苗（如HBsAg-抗體復(fù)合物疫苗）。