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小鼠腫瘤模型構建

簡要描述:關于小鼠腫瘤模型構建的詳細方案,涵蓋常用方法(移植瘤、基因工程模型、致癌劑誘導等)及關鍵操作要點

  • 更新時間:2025-07-04 16:22:57
  • 訪  問  量:424

詳細介紹

小鼠腫瘤模型構建類型選擇

模型類型適用研究周期優缺點
移植瘤模型藥物篩選、免疫治療2-6周操作簡單,但微環境不完整
基因工程模型(GEMM)腫瘤發生機制、靶向治療3-12個月自發成瘤,接近人類腫瘤但成本高
化學/物理誘導環境致癌機制2-6個月多階段成瘤,適合特定癌種(如肝癌、肺癌)

二、小鼠腫瘤模型構建移植瘤模型(皮下/原位)

1. 細胞來源

  • 細胞系:4T1(乳腺癌)、B16-F10(黑色素瘤)、HCT116(結腸癌)等。

  • 患者來源異種移植(PDX):將患者腫瘤組織移植至免疫缺陷鼠(NSG小鼠)。

2. 操作步驟(皮下移植)

  1. 細胞準備

    • 對數生長期細胞,胰mei消化后PBS重懸(活力>90%)。

    • 調整濃度:1×10?~1×10? cells/mL(根據細胞類型調整)。

  2. 接種

    • 小鼠腋下或背部皮下注射100-200μL細胞懸液(27G針頭)。

  3. 監測

    • 每2-3天測量腫瘤長徑(L)和短徑(W),體積公式:V = 0.5×L×W2。

    • 終點:腫瘤體積≥1000mm3或出現潰瘍。

3. 原位移植(以肝癌為例)

  1. 手術暴露肝臟:麻醉后左肋下切口,暴露肝左葉。

  2. 注射細胞:緩慢注入50μL HepG2細胞懸液(5×10? cells)。

  3. 縫合監測:術后鎮痛,4周后Micro-CT評估腫瘤負荷。


三、基因工程自發模型(以KPC胰腺癌模型為例)

1. 轉基因小鼠

  • 品系:LSL-Kras?12?/+; Trp53?1?2?/+; Pdx1-Cre(KPC模型)。

  • 誘導:Cre重組酶激活突變基因,胰腺自發成瘤(8-12周)。

2. 監測

  • 超聲:檢測胰腺腫塊(≥3mm為陽性)。

  • 血清標志物:CA19-9(胰腺癌)、AFP(肝癌)。


四、化學誘導模型(以DEN誘導肝癌為例)

  1. Day 1

    • 14日齡小鼠腹腔注射二乙基亞硝胺(DEN,25 mg/kg)。

  2. Week 6-8

    • 飼喂含0.05%二乙基己xi雌酚(DEN-promoter)飼料。

  3. Week 20-30

    • 解剖觀察肝腫瘤結節,計數并測量大小。


五、關鍵評估方法

1. 影像學

  • 小動物超聲:高頻探頭(≥30MHz)測腫瘤血流信號。

  • 活體熒光成像(IVIS):適用于熒光標記細胞(如Luciferase)。

2. 病理學

  • HE染色:評估腫瘤分化程度、壞死區域。

  • 免疫組化:Ki67(增殖)、CD31(血管生成)、TUNEL(凋亡)。

3. 免疫微環境分析

  • 流式細胞術:檢測腫瘤浸潤淋巴細胞(CD8+ T細胞、Treg)。

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